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Super GelRed&Super GelGreen常見問題解答

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爆款產品Super GelRed (BN20292)和 Super GelGreen(BN25006)是高靈敏、 無毒超安全和超穩定的熒光核酸凝膠染色試劑,可替代溴化乙錠 (EtBr, EB)等不安全的核酸染料。

常見問題解答

◆膠染法中 DNA 條帶彌散,拖尾?

 1.將 DNA 上樣量減少至三分之一或五分之一。Super GelRed 比 EB 更加靈敏,條帶的彌散或拖尾可能是超載造成的。這是 DNA ladder 的常見現象,推薦使用我司提供的與 Super GelRed 匹配性較好的 DNA ladder。

 2.確保使用的染料終濃度為1×。

 3.用泡染法(后染)代替膠染法(前染)。

 4.使用低濃度的瓊脂糖凝膠檢測大片段 DNA。

 5.更換電泳緩沖液,TBE 緩沖液比 TAE 緩沖液的效果好。

 6.loading buffer 含有 SDS 可能會引起條帶的彌散和拖尾,如果發生這種情況,建議使用泡染法。


◆膠染法中 DNA 遷移率的差異?

 由于 Super GelRed  的分子量較大,導致其不能進入細胞,保證了染料的安全性。但是,大分子量導致 DNA 的遷移速率可能會受到染料與 DNA 比率的影響。

 1. 將 DNA 上樣量減少至三分之一或五分之一。

 2. 使用泡染法,避免染料在電泳過程中對遷移造成干擾。


◆熒光較弱,一段時間后染料性能降低,或使用后染法染色不均勻?

 染料可能在溶液中已沉淀。

 1. 加熱 Super GelRed  至 45-50℃,2min,渦旋溶解。

 2. 染料在室溫下儲存,避免沉淀。


◆Super GelRed 是否可用于單鏈 DNA 或 RNA 染色?

 Super GelRed 可以用來染色單鏈 DNA 和 RNA,但是它對雙鏈 DNA 的靈敏度是單鏈 DNA 或 RNA 的五倍。


◆Super GelRed  與哪些 loadingbuffer 兼容?

 我們通常使用含有 15% glycerol, 7.5% Ficoll 400, 0.05% Bromophenol Blue,and 0.1% Patent Blue VF 的 6× loading buffer。在內部測試中,包含 0.1%Orange G 的 6X loading buffer 在 Super GelRed  的前染和后染中都有良好。


◆為什么我會看到污染或微笑的 DNA 條帶或不一致的 DNA 遷移?

 1.GelRed 和 GelGreen 是為安全而設計的分子量較大的高效親和型染料,在凝膠電泳中它們可以影響 DNA 的遷移。下列建議可能會提高凝膠中的 DNA 條帶分離效果。

 2.減少 DNA 上樣量。污染和微笑條帶往往是過量的 DNA 樣本造成的。推薦的泳道和已知濃度的樣品的上樣量為 50-200ng/泳道。對于未知濃度的樣品,嘗試 1/2 或 1/3 的常用上樣量

 3.制百分比濃度小的瓊脂糖凝膠。高分子量的 DNA 在低百分比的瓊脂糖凝膠分離效果比較好。

 4.更換電泳緩沖液。TBE 緩沖液比 TAE 緩沖液的效果更好。

 5.為了避免染料可能對 DNA 遷移的干擾,我們建議使用電泳后染膠。如果跑膠程序需要的上樣量超過推薦量,建議使用電泳后染色法。


◆為什么我會看到熒光弱,時間久染料性能降低,或后染染色后有一層染料在膠上?

 1.染料可能從溶液中沉淀出來。

 將 GelRed 或 GelGreen 溶液加熱至 45-50℃,保持 2 分鐘,然后渦旋溶解。在室溫下儲存染料以避免沉淀。

 2.如果您看到凝膠的高背景染色,您使用的瓊脂糖可能質量較差。瓊脂糖中的污染物可能與染料結合,導致背景增加。


◆GelRed 和 GelGreen 有什么區別?我應該選擇哪一個?

 GelRed 和 GelGreen 之間的主要區別在于它們的熒光激發和發射波長不同。GelRed 具有紅色熒光,類似于溴化乙錠。GelGreen 具有綠色熒光,類似于 SYBR Green 或 SYBR Safe。Gelred 與 UV 和藍光透射儀均兼容。GelGreen 適合在藍光透射儀下使用,使用戶可以避免將自身和 DNA 樣品暴露在紫外線輻射下。


◆為什么有 GelRed 和 GelGreen 兩種溶劑(二甲基亞砜 DMSO 和水)?在 DMSO 和水中的染料是否存在差異?

 水溶解的產品相對于儲存在 DMSO 中,是一個全新的改良。由于 DMSO 會被皮膚吸收,我們建議染料溶于水,以避免處理二甲基亞砜存在的潛在危害。鑒于有些工業用戶不希望改變實驗方案,我們將繼續提供儲存在DMSO 的染料。經過內部測試,兩種溶劑方案的效果完全一樣。


◆GelRed 和 GelGreen 用后應該如何處置?

 GelRed 和 GelGreen 通過 EPA 環保監管局 22 個指標測試。GelRed 和 GelGreen 已經被相關部門批準,可以直接傾倒入下水道。然而,由于地方規定的差異,您可以請聯系您當地的安全監管部門,獲取相關條例。詳情請查閱 Biotium 公司 GelRed / GelGreen 安全報告信息。百瑞極所生產 Super GelRed 和 GelGreen 和 Biotium 公司所產兩款產品完全等同。百瑞極的 GelRed 也通過了水生動物的實驗,完全可以直接排入下水道。


◆可以提前制作 GelRed/GelGreen 凝膠,儲存供以后使用嗎?

 可以,Super GelRed 和 GelGreen 染料是穩定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下,你可以將預制的 Super GelRed / GelGreen 凝膠儲存供以后使用。我們建議在 4℃ 避光貯存凝膠。


◆GelRed/GelGreen 后染法染色液可以重復使用嗎?

 可以。但是,如果靈敏度降低,請使用新鮮的染料溶液。


◆GelRed/GelGreen 是否與克隆、連接和測序等下游應用兼容?

 是。我們建議使用百瑞極DNA 純化回收試劑盒(BN12022)從 DNA 中去除染料。


 ◆GelRed/GelGreen 可否用于染色 sDNA 或 RNA 嗎?

 可以,但 Super GelRed 對單鏈核酸的敏感性比 GelGreen 約高 5 倍。使用熒光酶標儀的滴定測定顯示,與 ssDNA 和 RNA 結合的 Super GelRed 的熒光信號約是與 dsDNA 結合的一半。


◆我應該在我的 6×DNA loading buffer 中加入多少 Super GelRed/GelGreen ?

 我們不建議將 GelRed/GelGreen 直接添加到 loading 緩沖液中,因為這會導致條帶遷移不準確。百瑞極提供 6×Super GelRed Prestain Loading Buffer(BN12006),專為此應用而設計,但我們不推薦用于需要精確確定 DNA 大小的應用。為了最準確地確定 DNA 條帶大小,我們建議使用 GelRed 后染法(詳情請參閱 Super GelRed 使用說明書)。


◆GelRed/GelGreen 的檢測下限是多少?

 GelRed/GelGreen 是超敏感染料。一些用戶報告能夠檢測含有少于 0.1 ng DNA 的條帶。但是,染色的靈敏度取決于儀器功能和曝光設置。 


詳情咨詢

北京拜爾迪生物技術有限公司

咨詢熱線:010-62960866

網址:www.szsaikang.com


北京百瑞極生物科技有限公司

網址:http://www.biorigin.ltd/


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